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如何計(jì)算DNA片段的長(zhǎng)度
  • 發(fā)布日期:2021-05-18     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):2541
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      在測(cè)量比細(xì)胞小得多的DNA片段的長(zhǎng)度時(shí),微生物學(xué)家需要技巧,而方便的方法是凝膠電泳儀。此方法依賴于DNA片段帶電的事實(shí),它是更昂貴的方法(例如X射線晶體學(xué))的替代方法,該方法負(fù)責(zé)發(fā)現(xiàn)DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。

      凝膠電泳的工作原理

      由于DNA分子帶電,因此會(huì)受到電流的影響。當(dāng)您將它們放在中性凝膠中并在凝膠上通電時(shí),分子會(huì)向正極(陽(yáng)極)遷移。因?yàn)椴煌笮〉?/span>DNA分子帶有相同的電荷,所以較小的分子會(huì)更快地傳播,因此此過程將分子分成多個(gè)條帶,可以與已知大小的樣本進(jìn)行比較。

      電泳基本程序

      該凝膠通常由瓊脂糖制成,瓊脂糖是一種多糖,在緩沖溶液中加熱后會(huì)形成半固體,微孔凝膠。在一端,凝膠形成微小的凹痕,稱為孔,研究人員將研究中的DNA樣品與已知長(zhǎng)度的參考樣品(稱為DNA階梯)放置在一起。階梯片段的長(zhǎng)度已經(jīng)通過另一種方法例如X射線晶體學(xué)來(lái)預(yù)定。

      當(dāng)凝膠浸入導(dǎo)電溶液中并施加電壓時(shí),碎片開始遷移通過凝膠-先是較小的碎片,然后是較大的較慢的碎片。它們終根據(jù)大小形成類似頻譜的波段。

      一旦發(fā)生這種情況,研究人員將關(guān)閉電源,用DVA結(jié)合染料注入凝膠,并在紫外線下檢查樣本。使用梯子作為參考,研究人員可以確定可見帶中每個(gè)片段的大小。只有條帶可見–單個(gè)DNA片段太小而看不見。

      確定未知片段的長(zhǎng)度

      并非樣品中的每個(gè)譜帶都有可能與階梯上的譜帶配對(duì),因此,為了確定這些未知片段的大小,科學(xué)家通常會(huì)繪制一個(gè)圖。x軸上的是梯子中每個(gè)頻段的行進(jìn)距離(以毫米為單位),而y軸上的是每個(gè)頻段的大小。當(dāng)這些點(diǎn)通過曲線連接時(shí),在測(cè)量該帶行進(jìn)的距離(以毫米為單位)后,可以從曲線中推斷出任何帶的大小。

       

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